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Inmunología Molecular

 



enfermedad x (en donde esta involucrada la EPO), se les mide por EPO/RIA a pacientes a la mañana.. y todos dan valores menores a 10E-10 Molar

a) le parece factible el uso del kit comercial o de algunos de los componentes del EPO/RIA para adaptarlo para medir anticuerpos anti EPO.(EPOA). Previamente diga cuales son los componentes esenciales del EPO/RIA, que es lo que mide y justifique en forma simple y sintetica la respuesta.
b) ademas de que en el supuesto caso de que la respuesta de a) fuera negativa o por motivos economicos, o de laboratorio no se puede adaptar la nueva tecnica, Sugeriría hacer de nuevo (de cero) la nueva tecnica? (diga componentes de la nueva tecnica, controles, y protocolo para el armado del mismo)
c) complete el siguiente cuadro y justifique la [tr] en Molar y el rango o limite de detección segun corresponda. (nota> tambien habia que justificar el resto de las opciones, nos lo dijo él personalmente)

                     analito que detecta |  FS     FF   | Curva de calibración | [tr] < a: en molar | rango o limite de deteccion

                                                                           si o no            |                          |     suero (1/10)
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
EPO/RIA
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EPOA/RBA





nota: en FS o FS, en el ria podias ponerle cualquiera que para VOS era el kit....es inventado... (lo dejo a tu criterio, diria Karina version Poskus)
La enfermedad celíaca (EC) es un trastorno de la tolerancia al gluten de la dieta (del extracto se obtiene gliadina). La EC aparece en individuos susceptibles en los que se detectan Acs anti gliadina (AGA) y anti endomisio (AE). El endomisio es una vaina que envuelve las fibras musculares lisas de los cortes de mucosa del tubo digestivo. Los AGA se determinan por ELISA y los AE por IFI en cortes de esófago de mono.
Los AE incluyen el Ac anti transglutaminasa tisular que se detecta por ELISA, utilizando tTg recombinante expresada en E. coli. Los isotipos de los marcadores son IgG e IgA y se determinan por lo general discriminadamente. Estos tests son de apoyo diagnóstico de EC y para el seguimiento de pacientes que reciben dietas libres de gluten. El control de calidad de los alimentos e insumos para elaborarlos se hace por técnicas inmunoquímicas adaptadas para determinar la gliadina y otras prolaminas con IRC que integran la familia de proteínas relacionadas y que se hallan en cereales.
A partir de esta información conteste:
1- ¿Cómo diseñaría un ELISA para AGA? Esquema y explicación concisa del procedimiento, considerando detección no discriminativa.
2- Diseñe un IFI para AE.
3- ¿Cómo obtendría el inmunobiológico tTg humano recombinante en un sistema procariota para ser utilizado en un ELISA? ¿Por qué no se recomienda utilizar un sistema eucariota como por ejemplo lisado de reticulocitos?
4- ¿Cómo discrimina isotipos de los marcadores en ELISA e IFI?
5- ¿Cómo determinaría gliadina en insumos alimentarios? Refiérase al diseño para medir el Ag en lugar de los Acs.
6- Si dispusiera de una preparación homogénea de proteína inmunorreactiva derivada de gliadina de trigo (G) y otra de una prolamina homóloga proveniente de otro cereal (P), ¿Cómo podría demostrar mediante RIA que el suero de un paciente con alto título de AGA reconoce ambas proteínas?
Esquematice 3 resultados posibles: uno con idéntica IRC, otro con IRC de tipo 1 para P respecto de G y otra de segundo tipo para P respecto de G.
Tercera de julio del 2007

1) a)obtener un ac monoclonal anti CD22+, estrategia de obtención desde el ag utilizado hasta la purificación del Mab
b)el Mab obtenido quiero corroborar que reconoce las celulas humorales. Describir la estrategia
c) repetidas veces inoculo con el Mab, porque vi rn adversa? Indique como se conoce dicha reacción y porque se produce
d) Describir una estrategia para evitar la reacción anterior.

2) a)Describir  EIA homogeneo y heterogeneo para cuantificar proteina usando Mab anti la proteina. Indique ventajas y desventajas.
b) se desea evidenciar CD4+ y CD+8 en una biopsia de tiroides, mediante un inmunoensayo de doble coloracion. Cual fluorocromo usaría, porque?

3) Autoanticuerpos
a)principio en que se basa un RBA
b) Diseñe un ensayo para su realización
c)factores qeu depende la sensibilidad del metodo
d)Ventajas y limitaciones que posee un ELISA respecto al RBA

4) mediante Peptidos Sinteticos indique que experimento llevaría a cabo para encontrar cual son los epitopes blanco de los LT CD4+autoreactivos en una enfermedad que no se bien como era.
Inmuno Molecular 2do prom 2008   Inmunología Molecular
   

1)a) Cómo se ejecuta un IFI para enfermedad autoinmune sistémica. Ventajas y desventajas.
b) Si se tiene un Ag clonado describir un método que utilizaría para enf autoinm sistémica. Comparar con el IFI del punto anterior ( vent y desv)
c)idem a pero para DM1 ( enf autoinmune organoespecif)
d)idem b para DM1

2)Se quiere detectar insulina y proinsulina en sueros normales (relación ins:proins 9:1) y en insulinoma (relación ins:proins 1:9). Se tiene un kit para insulina que no diferencia la ins de la proins, las detecta juntas; y otro kit, kit_Pro, con un Mab específico para proins que la detecta con S=1000,  IRC=0,1%. Es útil complementar los dos kits para los dos casos? Se puede detectar el insulinoma?

3)Se quiere hacer un control de calidad de insulina, que no debe tener más de 10ppm de proinsulina como contaminante.
a)Sirve el kit-Pro para este caso?
b)Si no sirve, qué solución propondría?
Mi parcial te cuento, era una intraduccion de media carilla hablando de la enfermedad celiaca, diciendo los AC que se formaban y como lo detectaban. Y despues como controlaban los alimentos pàra corroborar que no tienen gluten!!! Dentro de eso habia partes en negrita que era lo que habia que desarrollar en las preguntas que eran 6: 
1- diseñar un elisa para la deteccion de unos Ac 
2- diseñar una IFI para detectar los otros Ac  
3- como obtener la proteina recombinante en E. coli para sensibilizar la placa de Elisa y porque no podia usarse un sist de expresion eucariota 
4- como podria diferenciarse en el Elisa los dos isotipos de Ac formados: IgG e IgA 
5- como detectar la presencia de gliadina en los alimentos (yo ahi le puse RIA pero ni idea si era eso porque te decia que vos querias detectar el Ag, no los Ac) 
6- tenias la proteina gliadina y otra proteina P y te decia que los Ac las reconocian a ambas, que graficara los 3 posibilidades: P y G con IRC igual, P y G con IRC tipo I y P y G con IRC tipo II. 


FINAL Inmunomolecular

29/7/08 

  1. a) que principio fisico condiciona la fijación del antigeno o anticuerpo a las matrices plásticas en los métodos inmunoanalíticos habituales?

    b) exponga brevemente cual seria la concentración superficial óptima de un antigeno proteico X en una matriz de FS para el diseño optimizado de un test en el cual el analito fuese un Ac específico antiX

    c) si se invirtiese el diseño del modelo anterior y el analito fuese el Ag X en solucion. Cual deberia ser la cc superficial del Ac específico a fijar en la matriz para lograr la máxima eficiencia en el limite d detección? Refierase en este modelo a un Ria en FS 

  1. Si una enfermedad autoinmune relacionada a un autoanticuerpo específico anti X (marcador XAA) fuese rasteado en el pródromo temprano (cuando se espera la existencia de cc y/o afinidades muy bajas para los XAA) como seria la performance relativa y la posible correlación de los métodos en FF y FS?
 
  1. Si se tuviese q determinar la afinidad de los XAA en q circunstancias seria factible medirlo y que método seria apropiado aplicar (descríbalo esquemáticamente)?
 
  1. Suponga que para realizar experiencias sobre estimulación in vitro de LT con peptidos de la proteínas o para ensayar posibles fragmentos inductores de tolerancia en modelos animales con la enfermedad autoinmune en cuestion y determinar la respectiva RI humoral. Usted tuviese que mapear los epitopes para LT o LB.
    1. como generaría tales fragmentos y como lograría el mapeo?
    2. Si finalmente dispusiera de péptidos reconocidos por los XAA que tipo de IRC podrían exhibir esos péptidos como competidores en el sistema de interacción XAA/ trazador X?





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